Page 7 - 《西北农业学报》2021年第10期

10 期 丁燕玲等: 牛 miR-615 潜在生物学功能分析及其组织表达鉴定 · 1 4 3 7 ·

miR-615 茎环引物 1 μ L , 5xPrimeScri p tBuffer2 下脂 肪 等 8 个 组 织 中 的 表 达 量。 反 应 体 系:
4 μ L , RNaseFreeddH 2O4 μ L 。反应程序: 50℃ 2xChamQ UniversalSYBRq PCR MasterMix10
15 min , 85 ℃ 5s ; 反 应 结 束 后, 所 得 cDNA μ L , PrimerF0.8 μ L , PrimerR0.8 μ L , cDNA 模
-20 ℃ 保存, 备用。 板 2 μ L , RNaseFreeddH 2O6.4 μ L 。反应条件:
1.3.4 miR-615 组织表达分析 根据 miR-615 95 ℃ 预变性 30s , 95 ℃ 变性 10s , 56.5 ℃ 退 火
成熟体序列, 设计上、 下游及茎环引物, 以 18S 为 30s , 共 40 个 循 环。 每 个 样 品 做 3 个 重 复, 以
内参基因, 引物由上海生工生物工程有限公司合 2 -ΔΔCT 法计算相对表达量, 数据用 SAS8.2 软件
成, 详 细 信 息 见 表 2 。 采 用 q RT-PCR 法 检 测 进行 分析。
miR-615 在心、 肝、 脾、 肺、 肾、 瘤胃、 背最长肌、 皮
表 2 miR-615 定量引物信息
Table2 miR-615q uantitative p rimerinformation
类型 引物序列( 5'→3' ) 长度 / b p
T yp e Primerse q uence ( 5'→3' ) Len g th
RTPrimer : GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGA
miR-615 50
TACGACGATCCG
F : GGGGGTCCCCGGTGCT 16
R : AGTGCAGGGTCCGAGGTATT 20
18S F : GTGGTGTTGAGGAAAGCAGACA 22
R : TGATCACACGTTCCACCTCATC 22

2 结果与分析 1-A ), 在对该区域进行功能富集分析发现( 图 1-
B ), 该保守区域细胞定位于 nucleus , 主要参与蛋
2.1 miR-615 序列保守性分析 白质结合及转录等过程。牛 miR-615 保守区域 2
从 NCBI 数 据 库 中 检 索 出 牛 miR-615 的 序 和 3 也主要富集到转录过程, 表明 miR-615 的主
列, 并与人、 猕猴、 小鼠、 马、 猩猩、 犬等 11 个物种 要功能是 参 与 遗 传 物 质 的 转 录 过 程, 这 与 miR-
的 miR-615 序 列 进 行 比 对 分 析。 结 果 表 明 ( 图 NA 集合到靶位点从而影响靶基因转录的功能相
1 ), 不同物种之间的保守序列存在着一定差异, 但 一致。
Motif1 在所涉及的物种间是共同的保守区域( 图

A.11 个物种 miR-615 保守性分析; B. 牛 miR-6153 个保守区域功能富集分析( To p 5 )
A.Conservativeanal y sisofmiR-615in11s p ecies ; B.Functionalenrichmentanal y sisofthreeconservedre g ionsofmiR-615incattle
( to p 5 )
图 1 miR-615 保守性分析
Fi g .1 Conservativeanal y sisofmiR-615