Page 5 - 《西北农业学报》2021年第11期
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西 北 农 业 学 报 2021 , 30 ( 11 ): 1595-1602
ActaA g riculturaeBoreali-occidentalisSinica
网络出版日期: 2021-11-05 doi : 10.7606 / j .ssn.1004-1389.2021.11.001
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网络出版地址: htt p s :// kns.cnki.net / kcms / detail / 61.1220.S.20211104.1031.028.html
盐酸可乐定人工抗原及其鼠源多抗的制备
王 耀 , 曹金博 2 , 3 , 曹夕丹 , 李铁梅 , 邢云瑞 , 孟继秋 1 , 2 ,
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1
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庞杏豪 1 , 2 , 孙亚宁 , 陈秀金 , 李兆周 , 胡骁飞 2
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( 1. 河南科技大学 食品与生物工程学院, 河南洛阳 471003 ; 2. 河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室, 郑州 450002 ;
3. 西北农林科技大学 动物医学院, 陕西杨凌 712100 ; 4. 中国检验检疫科学研究院, 北京 100176 )
摘 要 以盐酸可乐定( Clonidineh y drochloride , CLO ) 的衍生物盐酸阿可乐定( A p raclonidineh y drochloride ,
ACLO ) 为半抗原, 采用重氮化法合成人工抗原, 免疫小鼠制备高敏感性、 特异性的 CLO 鼠源多抗并进行鉴
定, 为 CLO 单克隆抗体的制备奠定基础。将 ACLO 分别与牛血清白蛋白( Bovineserumalbumin , BSA ) 和鸡
卵清蛋白( Ovalbumin , OVA ) 偶联, 合成免疫原 CLO-BSA 和包被原 CLO-OVA , 经紫外扫描和 SDS-PAGE 凝
胶电泳鉴定偶联效果后, 免疫 BALB / c小鼠, 并对获得的鼠源多抗采用间接 ELISA 和间接竞争 ELISA 鉴定
其特性。结果显示, 免疫的 4 只小鼠血清抗体效价均达到 1∶25600 以上, 其中 2 号小鼠的抗体敏感性最高,
半数抑制质量浓度( IC 50 ) 为 7.026n g / mL , 与其他几种常见瘦肉精类药物的交叉反应率均小于 0.1% , 特异性
良好。表明成功合成免疫原性良好的 CLO 人工抗原, 并获得敏感性高、 特异性强的 CLO 鼠源多抗, 为其单克
隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立奠定良好基础。
关键词 盐酸可乐定; 人工抗原; 多抗; ELISA
中图分类号 S852.4 文献标志码 A 文章编号 1004-1389 ( 2021 ) 11-1595-08
盐酸可乐定( Clonidineh y drochloride , CLO ) 部 1519 号 公 告 中 严 令 禁 止 在 养 殖 过 程 中 添 加
属于 α2 肾上腺受体激动剂, 化学名为[ 2- ( 2 , 6- 二 CLO 。但出于经济利益驱使, 目前仍有一些在家
氯苯基) 亚 氨 基] 咪 唑 啉, 其 结 构 式 如 图 1-A 所 畜养殖 中 违 法 使 用 CLO 的 现 象。 因 此, 建 立
示, 临床上主要用于治疗高血压、 偏头痛、 绝经期 CLO 残留的简便、 快速、 准确、 灵敏和高通量的检
潮热、 痛经等病症, 将其与中枢神经抑制药合用, 测方法尤为重要, 对保障动物源性食品安全具有
可产生协同抑制作用, 与降压药合用可加强降压 重要的现实意义。
作用 [ 1-3 ] 。 CLO 为咪唑啉的衍生物, 可刺 激 垂 体 目前关于 CLO 残留的检测方法主要包括高
分泌生长激素, 将其添加在禽畜饲料或者饮水中 效液相色谱法( Hi g hp erformanceli q uidchroma-
可在很大程度上促进禽畜生长, 并改善营养代谢 to g ra p h y HPLC ) 、 气 相 色 谱 法 ( GasChroma-
[ 8 ]
,
途径, 重新分配脂肪肌肉比例, 从而起到提高瘦肉 to g ra p h y GC ) 、 高 效 液 相 色 谱—串 联 质 谱 法
[ 9 ]
,
率的作用 [ 4-5 ] , 被视为一种新型的瘦肉精类药物。 ( Hi g hp erformanceli q uidchromato g ra p h ytan-
有研究表明, CLO 具有极大的毒副作用, 人食用 dem masss p ectrometr y UPLC-MS ) 等, 此 类
[ 10 ]
,
含 CLO 残留 的 动 物 源 性 食 品 后, 食 品 中 残 留 的 检测方法虽然检测精确度较高, 假阳性和假阴性
CLO 将在体内大量蓄积, 严重危害人身健康, 其 率较低, 但需要的仪器较为昂贵, 需要专业培训的
导致的中毒症状主要包括口干、 嗜睡、 头痛、 恶心、 操作人员和一定的图谱分析能力, 同时样品的前
呕吐、 便秘、 心悸、 精神抑郁等 [ 6-7 ] 。因此, 原农业 处理过程较为复杂, 不利于运输中易受损样品和
收稿日期: 2021-03-06 修回日期: 2021-04-13
基金项目:国 家 自 然 科 学 基 金 ( 31702218 ); 国 家 级 大 学 生 创 新 创 业 训 练 计 划 ( 202010464024 ); 河 南 省 青 年 人 才 托 举 工 程
( 2020HYTP029 ); 河南省动物免疫学重点实验室开放课题( PKLAI20170603 ); 河南省科技攻关( 182102110445 ); 河南
省自然科学基金( 182300410038 ); 河南省农业科学院科研发展专项资金( 2019CY04 )。
第一作者:王 耀, 男, 博士, 副教授, 从事抗体制备与免疫分析技术研究。 E-mail : wan gy ao@haust.edu.cn
曹金博, 男, 博士研究生, 从事抗体制备与免疫分析技术研究。 E-mail : 1458202240@ qq .com
通信作者:胡骁飞, 男, 博士, 研究员, 主要从事动物营养、 食品及饲料免疫分析技术研究。 E-mail : huxf1972@126.com