Page 8 - 《西北农业学报》2022年第7期
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GenBank 数 据 库, 获 得 序 列 号 分 别 为: JMC111 : 100% [ 17 ] 。
MT815606 、 Z422 : MT815607 , 基于 16SrRNA 基 目前对 S.e q ui 分离株 seM 进行基因分型和
因的序列比较( 图 4 ) 和系统进化树( 图 5 ), 可将所 遗传进化分析已成为研究该病分子流行病学的重
有比较菌株分为 3 个群, 其中本研究中的两株分 要手段。国外对于 S.e q ui 分离株进行的分子水
离菌 Z422 及JMC111 归属 Ⅰ 群, Ⅱ 群和 Ⅲ 群 平的基因分型和遗传进化研究较多, 国内该方面
均为马链球菌兽疫亚种。比较结果还发现, 分离 的信息缺乏, 不利于对该病的防控提供流行病学
菌所在的 Ⅰ 群菌株的 16SrRNA 基因在 V5 区 数据。
具有特征性的序列。 seM 蛋白 N 端第 37 位至第 183 位的变异与
2.5 SeM 基因的扩增及序列分析 该菌对免疫压力和环境的适应性密切相关。通过
分离菌 Z422 、 JMC111 的 SeM 基因 PCR 扩 对 58 株 S.e q ui 分离株的序列分析发现, 21 个核
增后, 目的条带约 1560b p 图 6 ), 测序后在马链 苷酸的变异共导致 18 个氨基酸的取代, 这些证据
(
球菌 SeM 基因库中比对鉴定得到两个新基因型 表明seM 处于多样化的选择压力 [ 18-19 ] 。本研究
通过比较 2 株分离菌 seM 蛋白 N 端的氨基酸序
( 图 7 ), 菌 株 seM 208 ( JMC111 ) 和 seM 209
( Z422 )。 分 离 菌 与 马 链 球 菌 马 亚 种 参 考 菌 株 列, 发现突变主要发生在第 37 位 ~ 第 143 位 的
SeM 基因型的系统进化树分析结果显示, 这 2 株 21 个氨基酸中。刘云涛等 [ 20 ] 2015 年对新疆地区
分离自不 同 马 场 的 菌 株 亲 缘 关 系 较 远。分 离 株 的 5 株 S.e q ui 流行菌株进行了 seM 蛋白序列的
seM209 ( Z422 ) 与seM195 、 seM196 亲缘关系接 比较分析, 与参考菌株 S.e q ui4047seM 蛋白的
N 端多变区进行对比, 在这些菌株的 seM 蛋白的
近。分离株 seM 208 ( JMC111 ) 与 seM 112 、 seM
7 亲缘关系接近。 N 端区第 47 位 ~ 第 176 位共存在 6 个氨基酸的
对seM 蛋白 N 端 氨 基 酸 分 析 比 较 结 果 ( 表 变异( Aa47 、 52 、 57 、 58 、 62 、 125 )。
4 ) 表 明, 与 参 考 菌 株 S.e q ui4047 相 比, 分 离 菌 与 参 考 菌 株 比 较,分 离 菌 株 seM 208
seM208 ( JMC111 ) 在 N 端第 37~143Aa 间发生 ( JMC111 ) 在 SeM 基因的 N 端第 47 位 ~ 第 125
2个氨 基 酸 的 变 异, 而 分 离 于 不 同 马 场 的 seM 位氨 基 酸 位 点 之 间 共 有 2 个 氨 基 酸 ( Aa58 、
209 ( Z422 ) 在 N 端第 37~143Aa 间发生 6 个氨 Aa107 ) 的差异, seM 209 ( Z422 ) 则有 6 个氨基酸
基酸的变异。 的差异( Aa52 、 62 、 70 、 81 、 113 、 122 ), 2015 与2019
年新疆地方流行株 seM 蛋白的 N 端可变区氨基
酸的变化特点表明这些马源菌株 SeM 基因随着
时间发生着多样性的变化。
研究证明, 以 编 码 SeM 蛋 白 N 端 多 变 区 的
基因为 依 据 进 行 基 因 分 型 和 进 化 分 析 可 为 S.
e q ui 分 子 流 行 研 究 提 供 重 要 的 工 具 [ 10-12 , 18-19 ] 。
SeM 基因分型就是一种根据该基因 N 端的序列
变化对不同的S.e q ui 菌株进行分型的方法, 采用
该方法可以通过网络数据库对世界各地的流行菌
M.DL2000DNA 标准; 1.Z422 ; 2.JMC111 ; 3. 阴性对照
株序列进行比较, 为研究S.e q ui 菌株在世界范围
M.DL2000DNA marker ; 1.Z422 ; 2.JMC111 ; 3.Ne g a-
内的流行提供公共数据 [ 13 ] 。 Ivens等 [ 21 ] 对145 株
tivecontrol
英国 2010 年的分离株进行了比对分析, 共发现了
图 3 分离菌 16SrRNAPCR 扩增结果
Fi g .3 PCRam p lificationresultsof16SrRNA 23 个不同的基因型, 根据遗传距离的远近又将其
分为 4 个群: seM9g rou p 群、 seM6 群、 seM8 群
3 讨 论 及seM3 群。 John 等 [ 22 ] 根 据 研 究 结 果 推 测, 编
马腺疫一直困扰着世界各国马产业的发展, 码seM 蛋白 N 端氨基酸的基因不断变异会导致
近年来随着新疆地区马养殖业的快速发展, 马腺 新的基因 型 产 生, 这 一 区 域 的 变 异 还 可 帮 助 S.
疫频繁发生。 2011 年新疆地区发生的马腺疫, 发 e q ui 逃避宿主的非特异性免 疫 但 不 会 干 扰 宿 主
病率达到 80%~90% , 当年生马驹的发病率高达 的特异性免疫。